Detalle de: Nuevas herramientas y conocimientos para dilucidar la interaccion parasito-hospedador entre Enteromyxum leei y la dorada: aplicaciones en acuicultura

ENTEROMYXUM LEEI ES UN PARASITO INTESTINAL MIXOZOO, EXTENDIDO EN LAS GRANJAS MEDITERRANEAS DE DORADA (SPARUS AURATA). EL PARASITO INVADE EL EPITELIO INTESTINAL DEL PEZ HOSPEDADOR COMPROMETIENDO SU INTEGRIDAD Y LA ABSORCION DE NUTRIENTES, PROVOCANDO EMACIACION. PARA DESARROLLAR MEDIDAS DE CONTROL CONTRA LA ENTEROMIXOSIS EN DORADA ES NECESARIO CARACTERIZAR A NIVEL MOLECULAR FACTORES QUE INTERVIENEN EN LA VIRULENCIA DEL PARASITO Y LOS MECANISMOS DE DEFENSA DEL HOSPEDADOR. PARA EL ESTUDIO DE ESTE PARASITO SE REQUIERE EL MANTENIMIENTO CONSTANTE DE INFECCIONES EXPERIMENTALES IN VIVO, YA QUE ACTUALMENTE NO SE DISPONEN METODOS DE CULTIVO IN VITRO PARA E. LEEI NI PARA NINGUN OTRO MIXOZOO. POR ELLO, EL COCULTIVO IN VITRO DEL PARASITO CON LINEAS CELULARES DE PEZ Y ORGANOIDES INTESTINALES DE DORADA, ASI COMO PROTOCOLOS DE CRIOPRESERVACION DEL PARASITO, SUPONDRAN UN GRAN AVANCE PARA EL ESTUDIO DE ESTE MODELO Y PERMITIRA REDUCIR EL USO DE ANIMALES DE EXPERIMENTACION. LOS ESTUDIOS DE ESTE PROYECTO TENDRAN EN CUENTA LAS DIFERENCIAS GENOMICAS, TRANSCRIPTOMICAS Y DE VIRULENCIA ENTRE UNA CEPA DE E. LEEI DE GRANJA ALTAMENTE PATOGENICA Y UNA CEPA MANTENIDA EN INFECCIONES EXPERIMENTALES DURANTE MAS DE 10 AÑOS. ENTRE LOS FACTORES DE VIRULENCIA DE LOS PARASITOS, LOS PRODUCTOS DE EXCRECION/SECRECION COMO PROTEASAS Y VESICULAS EXTRACELULARES, SON FUNDAMENTALES PARA COLONIZAR TEJIDOS, ADQUIRIR NUTRIENTES Y EVADIR O MODULAR LAS DEFENSAS DEL HOSPEDADOR. DEFINIR LAS PROTEASAS DEL PARASITO Y EL CARGO DE VES QUE INTERVIENEN EN LA COMUNICACION HOSPEDADOR-MICROBIOTA-PARASITO PERMITIRA DESCUBRIR MECANISMOS DE VIRULENCIA Y CANDIDATOS TERAPEUTICOS. LAS PROTEASAS SE IDENTIFICARAN IN SILICO EN EL GENOMA Y TRANSCRIPTOMA DE E. LEEI, Y SU IMPLICACION EN LA EXPLOTACION DEL HOSPEDADOR Y EN LA PATOGENICIDAD/VIRULENCIA SE INFERIRA A PARTIR DE ANOTACIONES PREVIAS DE OTROS PARASITOS Y MIXOZOOS, REVELANDO POSIBLES DIANAS TERAPEUTICAS. MEDIANTE TECNICAS ZIMOGRAFICAS, SE CARACTERIZARAN FUNCIONALMENTE LAS PROTEASAS DEL PARASITO EN EXTRACTOS CRUDOS Y SE LOCALIZARAN IN SITU EN SECCIONES INTESTINALES INFECTADAS. SE RECOGERAN MEDIOS DE CULTIVO DE EXPLANTES INTESTINALES O INTESTINOS ENTEROS PARASITADOS, SE AISLARAN VESICULAS EXTRACELULARES DE HOSPEDADOR, PARASITO Y MICROBIOTA Y SE ANALIZARA SU CARGO DE PROTEINAS Y ARN, COMPARANDOLO CON EL DE INTESTINOS NO PARASITADOS. ASI SE DESVELARAN NUEVOS MECANISMOS DE VIRULENCIA DEL PARASITO CON POTENCIAL TERAPEUTICO, Y LAS RESPUESTAS CON POTENCIAL PROFILACTICO DE HOSPEDADOR Y MICROBIOTA INTESTINAL FRENTE A LA ENTEROMIXOSIS. EL ESTUDIO DE LOS MECANISMOS INMUNITARIOS DEL PEZ FRENTE AL PARASITO SE CENTRARA EN DIFERENTES EFECTORES CELULARES: CELULAS RODLET INTESTINALES, MELANOMACROFAGOS DE ORGANOS HEMATOPOYETICOS Y LINFOCITOS. LAS POBLACIONES CELULARES SE AISLARAN DE PECES PARASITADOS Y SANOS Y SE SECUENCIARA SU ARNM, PERMITIENDO CARACTERIZAR SUS PRECURSORES FILOGENETICOS Y LOS MECANISMOS INMUNITARIOS QUE DIRIGEN. EN EL CASO DE LOS LINFOCITOS, SE HARA USO DE NUEVOS ANTICUERPOS ESPECIFICOS Y SECUENCIACION DE CELULA UNICA PARA PODER CARACTERIZAR ESTADOS DE ACTIVACION O DIFERENTES SUBPOBLACIONES POCO DEFINIDAS EN TELEOSTEOS. ESTO AYUDARA A IDENTIFICAR MARCADORES DE LA SALUD DE LOS PECES Y DE RESISTENCIA A ENFERMEDADES.ACUICULTURA\LINFOCITOS\MELANOMACROFAGOS\CELULAS RODLET\VESICULAS EXTRACELULARES\PROTEASAS\ORGANOIDES\INTERACCIONES PARASITO-HOSPEDADOR\ENTEROMYXUM LEEI\DORADA